Cosa offriamo
La facility si occupa di editing genomico per varie tipologie di progetti scientifici. Abbiamo sviluppato e validato procedure per generare knock-out genici nelle più comuni linee cellulari. Offriamo anche servizi per generare mutazioni più complesse, quali, ad esempio, knock-in, mutazioni puntiformi, tagging.
Servizio
Il servizio offerto comprende il disegno sperimentale, una verifica di fattibilità, editing genomico, selezione clonale e caratterizzazione della linea cellulare modificata per sequenziamento o Western blot. Cas9 può essere introdotta in forma plasmidica o come proteina purificata in complesso con guide RNA sintetiche.
Innovazione
Attraverso l’utilizzo di diversi metodi alternativi per il delivery di Cas9 siamo in grado, in molti casi, di introdurre le alterazioni genomiche desiderate, anche in linee cellulari che si trasfettano con bassa efficienza.
CRISPR/Cas9 è una tecnologia ancora giovane, in continua evoluzione. La nostra unità si aggiorna costantemente per poter offrire sempre la soluzione più efficiente e innovativa alle esigenze scientifiche dei nostri clienti.
Qualità
Il servizio implementa dei controlli di qualità a vari livelli nelle diverse fasi di lavoro. Vengono utilizzati solo reagenti certificati e controllati. Specifici protocolli vengono sviluppati e validati internamente allo scopo di ottimizzare l’efficienza di editing genomico. Buone pratiche di laboratorio per la gestione dei campioni e la tracciabilità dei dati vengono costantemente implementate per assicurare riproducibilità e qualità a tutti I livelli del flusso di lavoro.
Servizi
Standard KO
- In linee cellulari facili da trasfettare e validate per CRISPR/Cas9
- In altre linee cellulari previo test di fattibilità
- Introduzione di Cas9/gRNAs per trasfezione (plasmide o RNP)
- KO biallelico (solo per geni non essenziali)
- Screening dei cloni generati per sequenziamento o analisi Western blot
- Consegna di uno o più cloni
Custom
- KO genico via delezione
- Integrazione mirata (knock-in) di transgene in loci genici trascrizionalmente attivi (AAVS1, Rosa26)
- Introduzione di mutazioni puntiformi (disease modeling)
- Tagging di geni endogeni
- Creazione di linee cellulari reporter
Complementari
-
Pre- editing:
- Disegno delle gRNA e valutazione dei potenziali siti off-target
- Verifica della sequenza nucleotidica del target locus
- Identificazione del metodo più efficiente per l’introduzione di CRISPR/Cas9 (plasmide or RNP) nella linea cellulare modello
- Verifica dell’attività del promotore per l’espressione di Cas9 nella linea cellulare modello
- Verifica della clonabilità per diluizione limite e/o sorting della linea cellulare modello Post-editing:
- Genotipizzazione per sequenziamento Sanger dei cloni KO/KI ottenuti
- Conferma per Western blot del KO/KI a livello di proteina
FAQ
Di seguito una lista delle domande più frequenti:
Dipende dal tipo di progetto. Per generare un KO genico in una linea cellulare che si trasfetta con alta efficienza occorrono dalle 6 alle 10 settimane.
Progetti più complessi possono richiedere fino a 4-6 mesi.
Scrivi al nostro indirizzo e-mail o vieni direttamente in laboratorio, risponderemo a tutte le tue domande.
Un progetto CRISPR/Cas9 si compone di diversi moduli la cui combinazione in un unico flusso di lavoro dipende dallo scopo sperimentale finale. Per un’offerta specifica per il tuo progetto scrivi al nostro indirizzo e-mail o vieni direttamente in laboratorio.
Solitamente verifichiamo per Western blot o per sequenziamento Sanger. Per particolari esigenze ci puoi contattare al nostro indirizzo e-mail.
No, ma offriamo la produzione di cloni KO derivanti da due diverse gRNA.
No, il servizio non si applica a cellule primarie per motivi tecnici. Invece si applica ai ES cells. Per linee cellulari non convenzionali offriamo un test di fattibilità propedeutico che si compone di diversi saggi: efficienza di delivery di Cas9, clonabilità e verifica dell’attività del promotore.
Scrivi a crispr-service[@]cogentech.it o chiamaci al numero 02-574303804.
Se vuoi passare di persona ci trovi all’edificio 9, primo piano, open space lab.
Staff e Contatti
Mario Cinquanta
Mario Cinquanta si è laureato in Chimica e Tecnologia Farmaceutiche all’Università di Milano. Si è poi specializzato all’Istituto Mario Negri e successivamente ha svolto un post-dottorato quadriennale all’NIH di Bethesda (USA) presso il laboratorio di M.W. Nirenberg (premio Nobel per aver decifrato il codice genetico). Nel 2000 torna in Italia, dove svolge un secondo post-dottorato nel laboratorio di P.P. Di Fiore allo IEO di Milano. Infine dal 2003 lavora in IFOM, dove si è prima occupato di anticorpi monoclonali e poi, dal 2015, come responsabile del servizio di Genome Editing di Cogentech.
Marisa Aliprandi
Marisa Aliprandi si è laureata in Biologia all’Università di Milano. Dopo un periodo all’Istituto Mario Negri di Milano, nel 2002 approda in IFOM, dove si è occupata per diversi anni di anticorpi monoclonali. Dal 2015 lavora presso il servizio di Genome Editing di Cogentech.
Contacts
- Phone
+39 02 574 303 804 - Email
crispr-service[@] cogentech.it
